目前剖腹產代乳技術是建立清潔級動物群體或SPF 動物群體的唯一經濟有效的方法,但是剖腹產凈化技術給遠交類型群體帶來了/ 瓶頸效應0,數目過少會給基因帶來隨機的丟失[7] 。封閉群動物的凈化不同于近交系動物,要求能夠盡可能的保持現有的基因庫,使凈化前后生物學特性保持一致。因此,選擇待凈化小鼠時須保證他們來自不同的父母,且待剖的母鼠不能少于150 只。
實施子宮摘除術凈化小鼠實驗時,應注意凈化鼠與代哺乳鼠的產仔時間。我們凈化的是湖北的封閉群KM 小鼠,而用做代哺乳鼠是來自北京的SPF級KM 小鼠。由于不清楚來自兩個地區的KM 小鼠是否可以同步產仔,我們采用SPF 級比普通級早2d、兩種小鼠同時配種、SPF 級比普通級晚2 d 的方法進行研究。從3 批手術結果來看,第三批,代乳鼠比待凈化鼠早2 d 配種,配種50 對,成功32 例,育成小鼠253 只,成活率64% 。效果最好; 第一批即兩種小鼠同時配種,成功18 例,育成小鼠150 只,成活率36%,效果次之; 第二批SPF 級比普通級晚2 d 配種,僅成功7 例,育成小鼠57 只,成活率為14%,效果最差。
我們認為: KM 小鼠的配種時間應該是哺乳鼠早于待剖鼠,因為產仔3~ 4 d 內,母鼠對仔鼠的識別能力并不強,提早將代哺乳鼠準備好,待凈化的仔鼠一旦被剖出來就有母鼠哺乳。第二批的效果不理想,就是因為當時普通級動物已到了臨產期,而SPF級鼠中沒有現成的代哺乳鼠。另外基于KM 小鼠產仔數較多,代哺乳鼠應該是待凈化鼠的2 倍,即剖得不滿10 只仔鼠可由1 只代哺乳鼠帶養,剖得10 只以上的可由2 只代哺乳鼠分別代養。本次我們將一次產10 只以上的仔鼠,只保留10 只,多余的棄去,本身就是一個損失。
采取子宮摘除術進行生物凈化小鼠時,由于漏診和不可能持續不斷進行手術,會有一些待凈化的孕鼠自然生產。補救方法是將這些小鼠分批進行凈化,對已生產的母鼠,在它的第2 或3 胎要認真觀察避免漏診。
采用本文介紹的方法凈化小鼠,應該特別注意無菌操作。超凈工作臺的處理應在使用前用紫外線燈照射約1 h,每做完1 例手術后,用消毒液擦固定板,紫外燈照射5~ 10 min; 傳遞窗在使用前開燈至少2 h,并在手術過程中持續用紫外燈照射( 第二術者在取離體子宮時除外) ; 傳遞窗內/ 滅菌渡槽0,在術前換掉平時放置的消毒水,換上新鮮用滅菌水配制成37 e 的2%的過氧乙酸溶液; 手術結束后,從手術區到繁殖區用消毒液擦拭、噴霧、拖地,以防污染。
生物凈化
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